Plasmide CRISPR/Cas9 KO ZRSR1 (m): sc-423570

Présentation

Zrsr1 code pour ZRSR1, un facteur associé au spliceosome impliqué dans la reconnaissance et le traitement des introns de type U12 lors de l’épissage du pré‑ARNm. En modulant l’activité du spliceosome mineur, ZRSR1 peut influencer la maturation des transcrits, l’équilibre des isoformes et les programmes d’expression génique en aval liés au contrôle du cycle cellulaire et à la différenciation. Chez la souris, Zrsr1 se distingue aussi dans le contexte de l’empreinte génomique et des effets liés à l’origine parentale, offrant un cadre pour étudier la régulation allélique spécifique du traitement de l’ARN. La dérégulation de l’épissage des introns mineurs a été associée à des anomalies du développement et à des dysfonctionnements hématopoïétiques dans plusieurs systèmes modèles, ce qui fait de Zrsr1 une cible pertinente pour des études mécanistiques de la biologie des maladies liées à l’épissage.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ZRSR1 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Zrsr1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Zrsr1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Zrsr1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ZRSR1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Zrsr1 pour l'étude de la signalisation de ZRSR1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Zrsr1 essentiels à la fonction de ZRSR1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Zrsr1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le ZRSR1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le ZRSR1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Zrsr1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le ZRSR1 plasmide HDR (m) et le ZRSR1 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Zrsr1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Zrsr1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.