Plasmide CRISPR/Cas9 KO ZO-2 (h): sc-401395

Présentation

TJP2 code la protéine d’échafaudage des jonctions serrées ZO-2, membre de la famille des MAGUK, qui relie les claudines et l’occludine au cytosquelette cortical d’actine afin de soutenir l’intégrité des barrières épithéliales et endothéliales. ZO-2 coordonne également l’assemblage des jonctions avec des voies de signalisation qui régulent la polarité et la prolifération, notamment via des interactions influençant la dynamique des GTPases Rho et des programmes transcriptionnels associés aux jonctions. Par ses rôles dans le contrôle de la perméabilité paracellulaire et le maintien de l’organisation apico-basale, une altération de la fonction de TJP2/ZO-2 est pertinente pour les études sur la dysfonction de barrière et l’homéostasie tissulaire. La dérégulation de composants des jonctions serrées tels que ZO-2 est fréquemment étudiée dans des contextes d’inflammation, de fibrose et de transformation épithéliale, où le remodelage des jonctions et la perte de polarité sont marqués.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ZO-2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène TJP2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du TJP2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert TJP2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ZO-2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en TJP2 pour l'étude de la signalisation de ZO-2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de TJP2 essentiels à la fonction de ZO-2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de TJP2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le ZO-2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le ZO-2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus TJP2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le ZO-2 plasmide HDR (h) et le ZO-2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie TJP2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles TJP2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.