Plasmide Double Nickase (m) ZO-1: sc-423407-NIC

Le gène murin **Tjp1** code la protéine d’échafaudage des jonctions serrées **ZO-1 (TJP1)**, membre de la famille des guanylate kinases associées aux membranes, qui relie les claudines et l’occludine au cytosquelette d’actine cortical afin d’organiser la polarité apico-basale et la fonction de barrière paracellulaire. ZO-1 participe à l’assemblage et au maintien des jonctions serrées, en intégrant des signaux issus de la dynamique du cytosquelette régulée par les GTPases Rho et de la mécanotransduction au niveau des jonctions, et elle peut influencer des voies de signalisation dépendantes du contact qui coordonnent l’organisation épithéliale. Une localisation ou une expression altérée de ZO-1 est couramment utilisée comme indicateur de l’intégrité des jonctions serrées dans des modèles de dysfonction de la barrière épithéliale et endothéliale. Dans les systèmes murins, la perturbation de **Tjp1** permet des études mécanistiques de la perméabilité, du remodelage de la barrière associé à l’inflammation et de processus de développement nécessitant une architecture jonctionnelle précise.

ZO-1 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Tjp1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Tjp1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Tjp1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Tjp1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.