ZnT-10 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-403451

Übersicht

SLC30A10 kodiert ZnT-10, ein Mitglied der SLC30-Familie von Metalltransportern, das die intrazelluläre Homöostase zweiwertiger Kationen reguliert und eine Schlüsselrolle beim Mangan-Export und dessen Kompartimentierung spielt. Durch die Kontrolle der zellulären Manganspiegel beeinflusst ZnT-10 die Funktion von Metalloproteinen, Reaktionen auf oxidativen Stress sowie nachgeschaltete Signalprozesse, die von metallabhängiger enzymatischer Aktivität abhängen. Eine Fehlregulation von SLC30A10 steht mit einer abnormalen Mangananreicherung und einer veränderten Metallverarbeitung in Zusammenhang, was die Leber- und Neurophysiologie beeinträchtigen kann. Daher wird ZnT-10 in Signal- und Stoffwechselwegen untersucht, die Metalltransport, mitochondriale Funktion und zelluläre Stressanpassung in relevanten humanen Zellmodellen verknüpfen.

Das ZnT-10 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des SLC30A10-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des SLC30A10-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von SLC30A10 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die ZnT-10-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von SLC30A10-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der ZnT-10-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf SLC30A10-Exone abzielen, die für die ZnT-10-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere SLC30A10-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom ZnT-10 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom ZnT-10 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des SLC30A10-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das ZnT-10 HDR-Plasmid (h) und ZnT-10 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von SLC30A10-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten SLC30A10-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.