Plasmide CRISPR/Cas9 KO ZNRF3 (h): sc-418162

Présentation

ZNRF3 (zinc and ring finger 3) code une ligase E3 de l’ubiquitine transmembranaire qui agit comme régulateur de rétrocontrôle négatif de la signalisation Wnt/β-caténine en favorisant l’ubiquitination et le renouvellement des complexes récepteurs Frizzled et LRP5/6 à la surface cellulaire. Par ses interactions avec les R-spondines et les récepteurs LGR, ZNRF3 contribue à ajuster l’amplitude de la voie, influençant le maintien des cellules souches, l’homéostasie tissulaire et les programmes de différenciation. La perturbation de la régulation des récepteurs médiée par ZNRF3 peut potentialiser la signalisation Wnt et modifier les sorties transcriptionnelles contrôlant la prolifération et l’engagement de lignée. Des altérations génétiques et fonctionnelles de ZNRF3 ont été impliquées dans la biologie de maladies dépendantes de Wnt, ce qui en fait un nœud utile pour des études mécanistiques du contrôle de la voie.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ZNRF3 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène ZNRF3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du ZNRF3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert ZNRF3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ZNRF3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en ZNRF3 pour l'étude de la signalisation de ZNRF3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de ZNRF3 essentiels à la fonction de ZNRF3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de ZNRF3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le ZNRF3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le ZNRF3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus ZNRF3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le ZNRF3 plasmide HDR (h) et le ZNRF3 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie ZNRF3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles ZNRF3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.