Particules Lentivirales d'Activation (h2) ZNF831: sc-414334-LAC-2

Le gène humain ZNF831 code une protéine à doigts de zinc C2H2 contenant un domaine KRAB, dont on prédit qu’elle fonctionne comme un régulateur transcriptionnel se liant à l’ADN, en coordonnant des programmes d’expression génique via des interactions spécifiques de séquence avec des promoteurs et des enhancers ainsi que par le recrutement de complexes corépresseurs modifiant la chromatine. Par ces activités, ZNF831 est impliqué dans le contrôle épigénétique des décisions de destinée cellulaire, dans des réseaux transcriptionnels liés à l’immunité et dans des processus plus larges tels que la différenciation et la signalisation inflammatoire. Des études génétiques et d’expression ont associé ZNF831 à la susceptibilité aux maladies à médiation immunitaire et à une homéostasie immunitaire perturbée, ce qui étaye sa pertinence pour des investigations mécanistiques des circuits régulateurs associés à l’auto-immunité. La perturbation ciblée de ZNF831 permet aux chercheurs d’analyser les interactions entre facteurs de transcription et chromatine, de cartographier les réseaux de gènes en aval et de valider des variants régulateurs dans des modèles cellulaires humains.

Les particules d'activation lentivirales ZNF831 (h2) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de ZNF831 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales ZNF831 (h2) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription ZNF831, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de ZNF831. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif ZNF831 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.