Plasmide Double Nickase (h) ZNF74: sc-411084-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) ZNF74 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide ZNF74 Double Nickase (h) et le plasmide ZNF74 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant ZNF74. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: ZNF74 Antibody (B-11): sc-390612
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) ZNF74 | sc-411084-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) ZNF74 | sc-411084-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ZNF74 code une protéine humaine à doigts de zinc de type KRAB, impliquée dans la liaison à l’ADN de manière spécifique à la séquence et dans la répression transcriptionnelle, contribuant ainsi à une régulation de l’expression génique dépendante de la chromatine. Elle a été étudiée dans le contexte de l’organisation nucléaire et de programmes de contrôle transcriptionnel qui façonnent l’identité cellulaire et les réponses au stress. Des variations génomiques et une expression altérée de ZNF74 ont été associées à des phénotypes neuropsychiatriques et du développement, ce qui est compatible avec des rôles au sein de réseaux régulateurs sensibles au dosage et à l’état épigénétique. Ces caractéristiques font de ZNF74 une cible utile pour étudier les mécanismes de répression transcriptionnelle et le remodelage des voies en aval dans des modèles cellulaires humains.
ZNF74 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ZNF74 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ZNF74. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ZNF74. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ZNF74.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.