Plasmide CRISPR d'Activation (h) ZNF71: sc-410081-ACT

ZNF71 code une protéine à doigts de zinc C2H2 contenant un domaine KRAB, impliquée dans la régulation transcriptionnelle spécifique de séquence et le contrôle épigénétique de l’expression génique. En tant que répresseur transcriptionnel putatif, ZNF71 est supposée interagir avec la machinerie de remodelage de la chromatine associée au complexe KRAB/KAP1 (TRIM28), influençant la formation d’hétérochromatine et les programmes de silençage transcriptionnel qui façonnent l’identité cellulaire et les états transcriptionnels en réponse au stress. Une régulation altérée des facteurs de transcription à doigts de zinc est fréquemment associée à une différenciation dérégulée, à l’instabilité génomique et à des réseaux transcriptionnels oncogéniques, ce qui rend ZNF71 pertinente pour l’étude des circuits de régulation génique. Dans les systèmes humains, l’analyse de l’expression de ZNF71 et de ses effets transcriptionnels en aval soutient des travaux mécanistiques sur la modulation de voies dépendante de la chromatine et sur des signatures transcriptionnelles associées aux maladies.

ZNF71 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ZNF71 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ZNF71 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ZNF71 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ZNF71, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ZNF71. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ZNF71 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ZNF71 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ZNF71 dans les cellules tumorales présentant une expression de ZNF71 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.