Plasmide Double Nickase (m) ZNF526: sc-431684-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) ZNF526 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide ZNF526 Double Nickase (m) et le plasmide ZNF526 Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Zfp526. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
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Plasmide Double Nickase (m) ZNF526 | sc-431684-NIC | 20 µg | $410.00 |
Zfp526 code la protéine murine à doigts de zinc ZNF526, un facteur nucléaire putatif de liaison à l’ADN impliqué dans la régulation transcriptionnelle via des interactions avec la chromatine spécifiques de séquence. En tant que protéine multi–doigts de zinc C2H2, ZNF526 devrait participer à des réseaux de régulation génique qui influencent le maintien de l’état cellulaire, la spécification de lignée et des programmes transcriptionnels dépendants du contexte. La modulation du contrôle transcriptionnel médié par les doigts de zinc recoupe des voies impliquées dans la régulation épigénétique et la signalisation du développement, faisant de Zfp526 une cible utile pour étudier la robustesse de l’expression génique et l’architecture régulatrice. La dérégulation des facteurs de transcription à doigts de zinc est fréquemment associée à des phénotypes de différenciation et de prolifération altérés dans des modèles pertinents pour les maladies, ce qui étaye l’exploration mécanistique de Zfp526 dans l’homéostasie cellulaire.
ZNF526 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Zfp526 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Zfp526. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Zfp526. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Zfp526.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.