ZNF395 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403829-ACT

ZNF395 codifica um fator de transcrição do tipo “zinc finger” implicado na regulação de programas de expressão gênica ligados à adaptação ao estresse celular, incluindo redes transcricionais responsivas à hipóxia. Foi relatado que interage com vias de sinalização inflamatórias e da imunidade inata, influenciando vias associadas a citocinas e um reprograma­mento transcricional mais amplo. A atividade desregulada de ZNF395 tem sido associada a alterações no controle do estado celular e tem sido estudada no contexto da biologia tumoral e de outras condições em que a hipóxia e a inflamação moldam fenótipos relevantes para a doença. Como proteína nuclear ligante de DNA, ZNF395 é um nó útil para dissecar circuitos transcricionais que governam proliferação, sobrevivência e respostas ao microambiente.

ZNF395 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ZNF395 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ZNF395 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ZNF395 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ZNF395, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ZNF395. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ZNF395 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ZNF395 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ZNF395 em células tumorais com expressão de ZNF395 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.