ZNF395 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403829-ACT

ZNF395 kodiert einen Zinkfinger-Transkriptionsfaktor, der an der Regulation von Genexpressionsprogrammen beteiligt ist, die mit der Anpassung an zellulären Stress verknüpft sind, einschließlich hypoxie-abhängiger Transkriptionsnetzwerke. Berichten zufolge interagiert es mit Signalausgängen der Entzündungs- und angeborenen Immunantwort, beeinflusst zytokinassoziierte Signalwege sowie eine umfassendere transkriptionelle Umprogrammierung. Eine dysregulierte ZNF395-Aktivität wurde mit einer veränderten Kontrolle des Zellzustands in Verbindung gebracht und im Kontext der Tumorbiologie sowie weiterer Erkrankungen untersucht, bei denen Hypoxie und Entzündung krankheitsrelevante Phänotypen prägen. Als nukleäres, DNA-bindendes Protein ist ZNF395 ein nützlicher Knotenpunkt, um die transkriptionellen Schaltkreise zu analysieren, die Proliferation, Überleben und Reaktionen auf das Mikromilieu steuern.

ZNF395 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen ZNF395-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

ZNF395 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des ZNF395-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der ZNF395-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen ZNF395-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native ZNF395-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von ZNF395-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des ZNF395-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem ZNF395-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.