Plasmide CRISPR d'Activation (h) ZNF282: sc-409149-ACT

ZNF282 code un facteur de transcription à doigt de zinc impliqué dans la liaison spécifique à des séquences d’ADN et dans la régulation de programmes d’expression génique qui influencent l’état cellulaire et la différenciation. En tant que protéine régulatrice nucléaire, ZNF282 est associée à des processus de contrôle transcriptionnel coordonnés par l’ARN polymérase II et des cofacteurs liés à la chromatine, permettant une activation ou une répression dépendante du contexte de cibles en aval. Des modifications de l’expression de ZNF282 ont été rapportées dans des études transcriptomiques et fonctionnelles dans de multiples contextes cancéreux, ce qui concorde avec des rôles dans la prolifération, des réseaux de gènes associés à l’invasion et des réponses au stress cellulaire. Ces caractéristiques font de ZNF282 un nœud utile pour étudier les circuits transcriptionnels, la régulation épigénétique et le remodelage des voies de signalisation dans les cellules humaines.

ZNF282 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ZNF282 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ZNF282 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ZNF282 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ZNF282, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ZNF282. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ZNF282 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ZNF282 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ZNF282 dans les cellules tumorales présentant une expression de ZNF282 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.