Plasmide CRISPR d'Activation (h) ZIP2: sc-412062-ACT

SLC39A2 code ZIP2, un transporteur d’entrée du zinc situé dans la membrane plasmique, qui régule la disponibilité cytosolique de Zn2+ et soutient l’activité enzymatique dépendante du zinc, le repliement des protéines et le contrôle transcriptionnel. En modulant l’homéostasie du zinc, ZIP2 influence des processus tels que la différenciation épithéliale, les réponses au stress oxydatif et les voies de transduction du signal reposant sur des régulateurs sensibles au zinc. Des altérations du transport du zinc ont été associées à une perturbation de la fonction de barrière et de la signalisation inflammatoire, reliant la biologie de ZIP2 à des contextes incluant la dysfonction épithéliale et des phénotypes liés au cancer. En tant que composant du réseau plus large ZIP/SLC39, ZIP2 constitue un nœud accessible pour analyser comment les flux de zinc modulent le métabolisme cellulaire et les programmes d’adaptation au stress.

ZIP2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SLC39A2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ZIP2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SLC39A2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SLC39A2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ZIP2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SLC39A2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ZIP2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ZIP2 dans les cellules tumorales présentant une expression de SLC39A2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.