ZIP-kinase CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-409173

Übersicht

DAPK3 (ZIP-Kinase) ist eine Ca2+/Calmodulin-regulierte Serin/Threonin-Kinase, die die Aktomyosin-Dynamik und kontraktile Signalwege durch Phosphorylierung der regulatorischen Myosin-Leichtkette sowie verwandter zytoskelettaler Substrate koordiniert. Sie ist an Signalwegen beteiligt, die die Bildung von Stressfasern, Membran-Blebbing, Zytokinese und programmierten Zelltod steuern, und verknüpft damit den Umbau des Zytoskeletts mit zellulären Stressantworten. Die ZIP-Kinase-Aktivität überschneidet sich mit der durch ROCK/MLCK regulierten Kontraktilität und kann transkriptionelle Outputs über phosphorylierungsabhängige Signalknoten beeinflussen. Eine fehlregulierte DAPK3-Signalgebung wurde mit veränderter Proliferation, Motilität und Apoptose-Phänotypen in Verbindung gebracht, die für die Krebsbiologie relevant sind, ebenso wie mit vaskulären und entzündlichen Krankheitsmechanismen, bei denen der Tonus glatter Muskulatur und die zytoskelettale Organisation gestört sind.

Das ZIP-kinase CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des DAPK3-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des DAPK3-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von DAPK3 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die ZIP-kinase-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von DAPK3-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der ZIP-kinase-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf DAPK3-Exone abzielen, die für die ZIP-kinase-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere DAPK3-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom ZIP-kinase CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom ZIP-kinase CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des DAPK3-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das ZIP-kinase HDR-Plasmid (h) und ZIP-kinase HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von DAPK3-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten DAPK3-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.