ZIP-kinase Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-409173

Visão geral

DAPK3 (ZIP-kinase) é uma quinase de serina/treonina regulada por Ca2+/calmodulina que coordena a dinâmica actomiosina e a sinalização contrátil por meio da fosforilação da cadeia leve regulatória da miosina e de substratos citosqueléticos relacionados. Participa de vias que controlam a formação de fibras de estresse, o blebbing de membrana, a citocinese e a morte celular programada, ligando a remodelação do citoesqueleto às respostas celulares ao estresse. A atividade da ZIP-kinase interage com a contratilidade regulada por ROCK/MLCK e pode influenciar desfechos transcricionais por meio de nós de sinalização dependentes de fosforilação. A desregulação da sinalização de DAPK3 tem sido associada a fenótipos alterados de proliferação, motilidade e apoptose relevantes para a biologia do câncer, bem como a mecanismos de doenças vasculares e inflamatórias em que o tônus do músculo liso e a organização do citoesqueleto estão perturbados.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO ZIP-kinase (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene DAPK3 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do DAPK3, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do DAPK3 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína ZIP-kinase.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de DAPK3 para a investigação da sinalização de ZIP-kinase, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) DAPK3 críticos para a função ZIP-kinase
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos DAPK3 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo ZIP-kinase Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo ZIP-kinase Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus DAPK3. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo ZIP-kinase Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR ZIP-kinase (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia DAPK3 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo DAPK3 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.