Plasmide Double Nickase (h) Zic4: sc-407517-NIC

ZIC4 code le facteur de transcription à doigts de zinc Zic4, un régulateur nucléaire qui se fixe à l’ADN pour contrôler des programmes d’expression génique au cours de la mise en place des structures embryonnaires et du neurodéveloppement. Zic4 participe à des réseaux transcriptionnels qui coordonnent la différenciation neuronale, l’identité régionale dans le cerveau en développement et la morphogenèse du cervelet, en interaction avec des voies de signalisation du développement telles que WNT et SHH, qui façonnent la ligne médiane dorsale et les structures du rhombencéphale. Des altérations du dosage de ZIC4 ou une perturbation de sa fonction régulatrice ont été associées à des malformations cérébrales congénitales et à des phénotypes neurodéveloppementaux, ce qui en fait un locus utile pour étudier le contrôle transcriptionnel dans les lignées neurales. Dans des modèles cellulaires, la perturbation de ZIC4 aide à définir les réseaux de régulation génique qui gouvernent les décisions de destinée des progéniteurs, la maturation neuronale et des états de chromatine spécifiques de lignée.

Zic4 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ZIC4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ZIC4. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ZIC4. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ZIC4.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.