Plasmide Double Nickase (h) ZFYVE27: sc-407267-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) ZFYVE27 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide ZFYVE27 Double Nickase (h) et le plasmide ZFYVE27 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant ZFYVE27. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) ZFYVE27 | sc-407267-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) ZFYVE27 | sc-407267-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ZFYVE27 (également appelée protrudine) code une protéine contenant un domaine FYVE, qui se lie au phosphatidylinositol-3-phosphate et s’associe aux membranes endosomales afin de coordonner le trafic membranaire. Elle participe au transport des endosomes vers la membrane plasmique, à la croissance des neurites et à la dynamique des vésicules dépendante des microtubules via des interactions avec des GTPases Rab, des moteurs de kinésine et des composants des sites de contact RE–endosome. En couplant le tri endosomal au transport polarisé, ZFYVE27 influence la morphogenèse neuronale ainsi que les voies impliquées dans le maintien des axones. Une dérégulation du trafic lié à ZFYVE27 a été associée à des phénotypes neurodégénératifs, notamment à des mécanismes en lien avec la paraplégie spastique héréditaire, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude des axonopathies et des défauts de transport intracellulaire.
ZFYVE27 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ZFYVE27 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ZFYVE27. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ZFYVE27. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ZFYVE27.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.