Plasmide CRISPR d'Activation (h) ZFR: sc-407242-ACT

La protéine humaine ZFR (zinc finger RNA-binding protein) est un facteur de liaison à l’ARN principalement nucléaire, impliqué dans la régulation post‑transcriptionnelle de l’expression génique, notamment via la modulation de l’épissage du pré‑ARNm et du traitement de l’ARN grâce à des interactions avec des complexes spliceosomaux et ribonucléoprotéiques. En façonnant l’utilisation des isoformes de transcrits et le devenir des ARN, ZFR peut influencer des programmes d’état cellulaire tels que la prolifération, la différenciation et l’expression génique en réponse au stress. Un traitement de l’ARN dérégulé est une caractéristique fréquente des cancers ainsi que des troubles du neurodéveloppement et des maladies neurodégénératives, ce qui fait de ZFR une cible pertinente pour des études mécanistiques des réseaux de régulation de l’ARN. L’étude de la fonction de ZFR peut aider à préciser comment les voies liées à l’épissage et les protéines liant l’ARN coordonnent les résultats d’expression génique dans les cellules humaines.

ZFR Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ZFR sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ZFR Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ZFR dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ZFR, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ZFR. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ZFR natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ZFR au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ZFR dans les cellules tumorales présentant une expression de ZFR silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.