Plasmide CRISPR/Cas9 KO ZFP37 (h): sc-416996

Présentation

ZFP37 (zinc finger protein 37) est un facteur de transcription humain à doigts de zinc C2H2 comportant un domaine KRAB, impliqué dans la liaison à l’ADN de manière spécifique à la séquence et dans la répression transcriptionnelle. En tant que composant de complexes régulateurs de la chromatine associés à KRAB–KAP1/TRIM28, ZFP37 devrait influencer la formation de l’hétérochromatine, le silencement épigénétique et le maintien de programmes transcriptionnels spécifiques à certains types cellulaires. Ces activités relient ZFP37 à des processus nucléaires fondamentaux tels que l’organisation de la chromatine, la stabilité du génome et le contrôle de l’expression des éléments répétitifs. Une régulation altérée des voies des protéines KRAB à doigts de zinc a été associée à une différenciation dérégulée et à des états transcriptionnels oncogéniques, ce qui motive l’étude de ZFP37 au sein de réseaux de régulation génique pertinents pour les maladies.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ZFP37 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène ZFP37 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du ZFP37, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert ZFP37 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ZFP37.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en ZFP37 pour l'étude de la signalisation de ZFP37, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de ZFP37 essentiels à la fonction de ZFP37
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de ZFP37 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le ZFP37 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le ZFP37 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus ZFP37. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le ZFP37 plasmide HDR (h) et le ZFP37 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie ZFP37 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles ZFP37 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.