Plásmido Doble Nickase (h) ZEB: sc-400201-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)ZEB1 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa ZEB1 (h) y el plásmido de doble nickasa ZEB1 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a ZEB1. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: ZEB1 Anticuerpo (416A7H10): sc-81428
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) ZEB | sc-400201-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) ZEB1 | sc-400201-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ZEB1 codifica la proteína homeobox ZEB de unión a E-box con dedos de zinc, un regulador transcripcional que se une a motivos tipo E-box para modular programas de expresión génica que controlan la transición epitelio-mesenquimal, la polaridad celular y la diferenciación. Mediante interacciones con correpresores como CtBP y factores de remodelación de la cromatina, ZEB influye en vías como la señalización TGF-β/SMAD y en redes transcripcionales que gobiernan la adhesión y la remodelación del citoesqueleto. La actividad desregulada de ZEB1 se ha relacionado con alteraciones del patrón de desarrollo y de la plasticidad epitelial, y se estudia con frecuencia en contextos de invasión tumoral, fenotipos asociados a la metástasis y mecanismos de resistencia a terapias. Además, el control transcripcional dependiente de ZEB1 contribuye a estados similares a los de células madre y a cambios en la expresión de genes relacionados con la inmunidad en múltiples modelos de enfermedad.
ZEB1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ZEB1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ZEB1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ZEB1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ZEB1 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.