Plasmide CRISPR d'Activation (h) ZEB: sc-400201-ACT

Le gène humain **ZEB1** code la protéine homéobox à doigts de zinc liant les E-box **ZEB**, un facteur de transcription spécifique de séquence qui se fixe à des motifs de type E-box afin de coordonner des programmes de régulation génique contrôlant la transition épithélio‑mésenchymateuse (TEM), la polarité cellulaire et la différenciation. ZEB1 intègre des signaux issus des voies TGF‑β/SMAD, Wnt/β‑caténine, Notch et MAPK, et interagit avec des réseaux de microARN tels que la famille miR‑200 pour moduler la répression et l’activation transcriptionnelles. Une activité altérée de ZEB1 est fréquemment associée à des changements d’adhérence cellulaire, de motilité et de plasticité de lignée, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude de la fibrose, des troubles du développement et de la biologie tumorale. En tant que régulateur central des états transcriptionnels associés à la TEM, ZEB1 est largement utilisé comme nœud moléculaire pour explorer des programmes d’expression génique dépendants du contexte.

ZEB1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ZEB1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ZEB1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ZEB1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ZEB1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ZEB1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ZEB1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ZEB1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ZEB1 dans les cellules tumorales présentant une expression de ZEB1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.