Plasmide CRISPR d'Activation (h) ZDHHC7: sc-405072-ACT

Le gène humain **ZDHHC7** code une palmitoyltransférase à domaine DHHC qui catalyse la **S‑palmitoylation** de protéines substrats, une modification lipidique réversible qui contrôle l’association aux membranes, le trafic intracellulaire, la stabilité et l’intensité de la signalisation. En modulant le paysage de la palmitoylation au sein des endomembranes, ZDHHC7 contribue à des processus tels que la localisation des récepteurs et des protéines adaptatrices, le transport vésiculaire et la coordination des voies de transduction du signal en aval. Une palmitoylation dérégulée est associée à une altération de l’homéostasie des protéines et à des réseaux de signalisation aberrants impliqués dans la transformation oncogénique et des phénotypes liés à l’immunité, faisant de ZDHHC7 un nœud pertinent pour des études mécanistiques de la régulation au voisinage des membranes. L’étude fonctionnelle de ZDHHC7 peut aider à préciser comment le tri dépendant de la lipidation et la signalisation compartimentée influencent l’état cellulaire et des voies impliquées dans les maladies.

ZDHHC7 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ZDHHC7 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ZDHHC7 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ZDHHC7 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ZDHHC7, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ZDHHC7. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ZDHHC7 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ZDHHC7 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ZDHHC7 dans les cellules tumorales présentant une expression de ZDHHC7 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.