Plasmide CRISPR d'Activation (h) ZBTB1: sc-411630-ACT

ZBTB1 (zinc finger and BTB domain containing 1) code un régulateur transcriptionnel qui intègre des interactions protéine-protéine médiées par le domaine BTB/POZ avec la liaison à l’ADN assurée par des doigts de zinc C2H2, afin de façonner des programmes d’expression génique spécifiques des lignages et dépendants du contexte. Dans la biologie des cellules hématopoïétiques et immunitaires, ZBTB1 est impliqué dans le contrôle de la différenciation, de la prolifération et de la stabilité du génome, reliant le contrôle transcriptionnel à la réponse aux dommages de l’ADN et au maintien des états de la chromatine. Une activité altérée de ZBTB1 peut perturber les réseaux régulateurs gouvernant le développement lymphoïde et les réponses au stress, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude de phénotypes de type immunodéficience, de dérégulations hématologiques et de circuits transcriptionnels oncogéniques. En tant que facteur nucléaire, ZBTB1 est fréquemment étudié dans la cartographie des voies impliquées dans la répression/l’activation transcriptionnelle, l’organisation de la chromatine et les processus associés aux points de contrôle.

ZBTB1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ZBTB1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

ZBTB1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ZBTB1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ZBTB1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de ZBTB1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ZBTB1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de ZBTB1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie ZBTB1 dans les cellules tumorales présentant une expression de ZBTB1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.