Plasmide Double Nickase (m) ZBP1: sc-425482-NIC

Le gène murin **Zbp1** code **ZBP1** (également appelé **DAI**), un capteur cytosolique d’acides nucléiques qui se lie aux acides nucléiques en **forme Z** et agit comme adaptateur de l’immunité innée. Lorsqu’il détecte des acides nucléiques viraux ou endogènes, ZBP1 recrute **RIPK3** et d’autres nœuds de signalisation afin d’induire des programmes de gènes stimulés par l’interféron et des réponses inflammatoires, et peut également se coupler à des voies de mort cellulaire régulée, dont la **nécroptose**. Grâce à des interactions avec la signalisation de l’interféron de type I, l’activation de **NF-κB** et des processus associés à l’inflammasome, ZBP1 contribue à façonner la restriction antivirale et le niveau de tonus inflammatoire tissulaire. Une signalisation ZBP1 dérégulée a été impliquée dans une inflammation excessive et une immunopathologie lors d’infections ainsi que dans des modèles de maladies inflammatoires et neuro-immunes, ce qui en fait une cible utile pour des études mécanistiques de l’immunité innée.

ZBP1 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Zbp1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Zbp1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Zbp1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Zbp1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.