Plasmide CRISPR/Cas9 KO ZAR1 (h): sc-406501

Présentation

ZAR1 (zygote arrest 1) code une protéine liant l’ARN, surtout connue pour ses rôles au cours du développement embryonnaire précoce, où elle soutient la transition ovocyte-zygote et le contrôle post-transcriptionnel des ARNm maternels. Dans les cellules humaines, ZAR1 est associée à la régulation de la stabilité et/ou de la traduction des ARNm ainsi qu’à la dynamique des granules ribonucléoprotéiques cytoplasmiques, des processus qui influencent la progression du cycle cellulaire et la compétence développementale. Une expression altérée ou une dérégulation de facteurs de régulation de l’ARN de type « effet maternel » et associés à la lignée germinale a été liée à des phénotypes d’infertilité et à des échecs du développement dans des systèmes modèles, ce qui rend ZAR1 pertinente pour l’étude de la biologie de la reproduction et des voies du développement précoce. En tant que facteur enrichi d’origine maternelle, ZAR1 constitue également un point d’entrée pratique pour étudier l’intersection entre les réseaux de régulation de l’ARN, les réponses au stress et les programmes de différenciation.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ZAR1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène ZAR1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du ZAR1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert ZAR1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ZAR1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en ZAR1 pour l'étude de la signalisation de ZAR1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de ZAR1 essentiels à la fonction de ZAR1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de ZAR1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le ZAR1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le ZAR1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus ZAR1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le ZAR1 plasmide HDR (h) et le ZAR1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie ZAR1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles ZAR1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.