Plasmide CRISPR d'Activation (h) Z39Ig: sc-404067-ACT

Le gène humain VSIG4 (Z39Ig) code un récepteur immunorégulateur apparenté à la famille B7, exprimé principalement par les macrophages résidents des tissus, notamment les cellules de Kupffer, où il module le dialogue entre l’immunité innée et l’immunité adaptative. VSIG4 agit comme récepteur du complément pour des fragments de C3 et participe à la clairance phagocytaire ainsi qu’à la suppression de l’activation des lymphocytes T, contribuant à façonner le tonus inflammatoire au sein du microenvironnement tissulaire. Par ces activités, Z39Ig influence l’opsonisation médiée par le complément, les programmes de polarisation des macrophages et une signalisation de type point de contrôle immunitaire qui limite une production excessive de cytokines. Une expression dérégulée de VSIG4 et des voies associées aux macrophages font fréquemment l’objet d’études dans des contextes tels que l’inflammation chronique, la fibrose, la biologie des infections et les mécanismes d’échappement immunitaire tumoral.

Z39Ig Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de VSIG4 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Z39Ig Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus VSIG4 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription VSIG4, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Z39Ig. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus VSIG4 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Z39Ig au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Z39Ig dans les cellules tumorales présentant une expression de VSIG4 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.