Plásmido CRISPR de Activación (h) YY1: sc-400395-ACT

YY1 (Yin Yang 1) es un factor de transcripción de dedos de zinc expresado de manera ubicua que actúa tanto como activador como represor para coordinar programas de expresión génica dependientes del contexto. Regula la arquitectura de la cromatina y la transcripción mediada por la ARN polimerasa II al interactuar con complejos del grupo Polycomb, modificadores de histonas y elementos del promotor central, influyendo en procesos como la progresión del ciclo celular, las respuestas al daño del ADN, la diferenciación y la adaptación metabólica. YY1 está implicado en el bucleo potenciador–promotor y en el control de redes transcripcionales específicas de linaje, lo que lo vincula con vías como la regulación epigenética, la señalización Wnt/β-catenina y la transcripción sensible al estrés. La actividad desregulada de YY1 y los cambios en sus paisajes de unión se han asociado con estados transcripcionales oncogénicos, alteraciones en la señalización inmunitaria e inflamatoria y fenotipos del neurodesarrollo, lo que lo convierte en un nodo ampliamente utilizado para estudios mecanísticos del control transcripcional.

YY1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de YY1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

YY1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus YY1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional YY1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de YY1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo YY1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de YY1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía YY1 en células tumorales con expresión de YY1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.