Plasmide CRISPR/Cas9 KO YME1L1 (h): sc-409793

Présentation

YME1L1 code une métalloprotéase i-AAA dépendante de l’ATP, localisée dans les mitochondries et ancrée dans la membrane interne, où elle assure le contrôle qualité des protéines membranaires et contribue au maintien de l’intégrité de la chaîne respiratoire. En couplant l’hydrolyse de l’ATP à la protéolyse, YME1L1 régule la protéostasie mitochondriale, la morphologie de l’organite et l’adaptation au stress, notamment via l’élimination de composants mal repliés ou endommagés au niveau du domaine orienté vers l’espace intermembranaire. Elle participe à la dynamique mitochondriale en maturant des facteurs qui influencent l’architecture des crêtes et l’équilibre fission–fusion, reliant ainsi son activité à l’homéostasie bioénergétique et à la gestion des espèces réactives de l’oxygène. Des altérations de la fonction de YME1L1 ont été associées, dans des études génétiques, à des phénotypes de dysfonction mitochondriale ainsi qu’à des mécanismes de maladies neurodéveloppementales ou neuromusculaires, ce qui en fait une cible pertinente pour modéliser des défauts de contrôle qualité mitochondrial.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO YME1L1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène YME1L1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du YME1L1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert YME1L1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine YME1L1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en YME1L1 pour l'étude de la signalisation de YME1L1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de YME1L1 essentiels à la fonction de YME1L1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de YME1L1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le YME1L1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le YME1L1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus YME1L1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le YME1L1 plasmide HDR (h) et le YME1L1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie YME1L1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles YME1L1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.