Plasmide CRISPR d'Activation (h2) YDJC: sc-414675-ACT-2

Le gène humain YDJC code une protéine conservée, putative, de la famille des désacétylases/épimérases, impliquée dans le traitement des métabolites cellulaires et le maintien de la protéostasie, avec des données soutenant des rôles dans l’équilibre rédox et les réponses adaptatives au stress. YDJC a été associé à la modulation du contrôle qualité des protéines et des voies homéostatiques liées aux mitochondries, ce qui le rend pertinent pour des études sur le stress oxydant, la signalisation associée à l’inflammation et le remodelage métabolique. Des altérations de l’expression de YDJC ont été rapportées dans plusieurs contextes pathologiques, notamment dans le cancer et au sein de signatures moléculaires associées à la neurodégénérescence, suggérant son intérêt comme nœud mécanistique pour explorer une résilience cellulaire dérégulée. L’édition génétique de YDJC permet d’interroger fonctionnellement sa contribution aux réseaux métaboliques et de réponse au stress, en appui à des expériences de cartographie des voies, d’analyse génotype–phénotype et de génération de modèles pour des études à l’échelle des systèmes sur la régulation des états cellulaires.

YDJC Le plasmide d'activation CRISPR (h2) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de YDJC sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

YDJC Le plasmide d'activation CRISPR (h2) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus YDJC dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription YDJC, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de YDJC. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus YDJC natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de YDJC au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie YDJC dans les cellules tumorales présentant une expression de YDJC silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.