Plasmide CRISPR d'Activation (h) YB-1: sc-401385-ACT

YBX1 code la protéine humaine de liaison à la boîte Y 1 (YB-1), un facteur multifonctionnel se liant à l’ADN et à l’ARN qui régule la transcription, l’épissage de l’ARNm, la traduction et la dynamique des granules de stress. YB-1 participe aux réponses cellulaires au stress et influence le contrôle du cycle cellulaire, l’apoptose et la signalisation des dommages à l’ADN via une régulation étendue des programmes d’expression génique. Elle a été associée à des voies contrôlant la prolifération et la signalisation inflammatoire, notamment par la modulation de réseaux transcriptionnels oncogéniques et la régulation post‑transcriptionnelle de transcrits liés à la croissance. Une activité dérégulée de YBX1/YB-1 est fréquemment associée à la biologie tumorale, à des phénotypes liés aux métastases et à la résistance au stress cellulaire, ce qui en fait une cible majeure pour des études mécanistiques de la régulation génique et de la protéostasie.

YB-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de YBX1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

YB-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus YBX1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription YBX1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de YB-1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus YBX1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de YB-1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie YB-1 dans les cellules tumorales présentant une expression de YBX1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.