XRN1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401910-ACT

O XRN1 humano codifica uma exorribonuclease 5′–3′ altamente conservada que impulsiona a degradação de mRNA no citoplasma ao degradar transcritos desacapados e ao eliminar fragmentos de RNA gerados durante o turnover de RNA. O XRN1 coordena-se com fatores de desacapagem e com corpos de processamento (P-bodies) para moldar a homeostase do transcriptoma, influenciando vias como a degradação mediada por códons de parada prematuros (nonsense-mediated decay), o silenciamento mediado por microRNA e a detecção imune inata de RNAs aberrantes. Ao regular a estabilidade de mRNAs envolvidos no controle do ciclo celular, na diferenciação e nas respostas ao estresse, o XRN1 ajuda a manter a proteostase e a fidelidade da sinalização. A degradação de RNA desregulada e a atividade alterada de XRN1 têm sido associadas a programas de expressão gênica aberrantes observados na biologia do câncer, em fenótipos do neurodesenvolvimento e em interações vírus–hospedeiro, tornando-o um nó útil para estudos mecanísticos de regulação pós-transcricional.

XRN1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de XRN1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

XRN1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus XRN1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição XRN1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de XRN1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus XRN1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de XRN1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via XRN1 em células tumorais com expressão de XRN1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.