Plasmide Double Nickase (h) XPC: sc-401499-NIC

XPC code la protéine du groupe C du xeroderma pigmentosum, un capteur central des dommages dans la réparation par excision de nucléotides du génome global (GG-NER), qui détecte les lésions de l’ADN déformant l’hélice, telles que les dimères de pyrimidines cyclobutanes induits par les UV et les adduits chimiques volumineux. Après reconnaissance de la lésion, XPC coordonne le recrutement de TFIIH et des facteurs NER en aval afin d’initier le déroulement de l’ADN, l’excision et la resynthèse, contribuant ainsi à l’intégrité du génome et à la stabilité des fourches de réplication. La fonction de XPC s’articule avec la signalisation des dommages à l’ADN et le contrôle des points de contrôle du cycle cellulaire, influençant les réponses cellulaires au stress génotoxique. Des défauts génétiques de XPC sont à l’origine du xeroderma pigmentosum, groupe de complémentation C, et sont associés à une charge mutationnelle accrue et à une sensibilité élevée aux UV et aux mutagènes environnementaux.

XPC Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus XPC dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de XPC. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de XPC. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de XPC.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.