XPA CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401483-ACT

Das humane Gen **XPA** kodiert einen zentralen Faktor der DNA-Schadenerkennung im Nukleotid-Exzisionsreparatur‑(NER-)Weg, der helixverzerrende Läsionen verifiziert und die Rekrutierung von **TFIIH**, **RPA** und **ERCC1–XPF** koordiniert, um den Doppelstrangschnitt und die anschließende Reparatursynthese zu ermöglichen. Durch die Funktion als Gerüstprotein für Reparaturkomplexe an UV‑Photoprodukten und sperrigen chemischen Addukten trägt XPA dazu bei, die Genomintegrität während Replikation und Transkription zu bewahren. Eine Störung oder verminderte Aktivität von XPA beeinträchtigt die NER‑Kapazität, erhöht die Mutationslast und steigert die zelluläre Empfindlichkeit gegenüber genotoxischem Stress. Eine XPA‑Dysfunktion ist mit **Xeroderma pigmentosum** der Gruppe A verbunden und wird häufig in Studien zu DNA‑Reparaturdefekten, Mutagenese und Stressantwort‑Signalwegen genutzt.

XPA Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen XPA-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

XPA Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des XPA-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der XPA-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen XPA-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native XPA-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von XPA-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des XPA-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem XPA-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.