Plasmide CRISPR d'Activation (h) XIAP: sc-416497-ACT

La protéine inhibitrice de l’apoptose liée au chromosome X (XIAP) est un puissant suppresseur de la mort cellulaire programmée : elle se lie directement aux caspases effectrices telles que CASP3 et CASP7 et les inhibe, ainsi que la caspase initiatrice CASP9, via ses domaines BIR. Au-delà du blocage des caspases, XIAP participe à la signalisation dépendante de l’ubiquitine grâce à son activité de ligase E3 de type RING, en interaction avec des voies associées aux récepteurs du TNF et en modulant des programmes de survie liés à NF-κB. Par ces activités, XIAP contribue à déterminer la sensibilité cellulaire aux signaux apoptotiques intrinsèques et extrinsèques et façonne les réponses d’adaptation au stress. Une expression ou une fonction dérégulée de XIAP a été associée à des seuils d’apoptose modifiés et à des états de signalisation inflammatoire pertinents pour la biologie du cancer et la recherche sur les dysrégulations immunitaires.

XIAP Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de XIAP sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

XIAP Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus XIAP dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription XIAP, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de XIAP. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus XIAP natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de XIAP au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie XIAP dans les cellules tumorales présentant une expression de XIAP silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.