Plasmide Double Nickase (m) XBP1: sc-423727-NIC

Xbp1 code pour XBP1, un facteur de transcription à fermeture éclair à leucines (bZIP) qui agit comme effecteur central de la réponse aux protéines mal repliées (UPR), en aval de l’épissage de l’ARNm médié par IRE1α. XBP1 actif pilote des programmes transcriptionnels qui augmentent la capacité de repliement du réticulum endoplasmique, régulent la dégradation associée au RE (ERAD) et remodèlent la biosynthèse lipidique afin de rétablir la protéostasie lors d’un stress sécrétoire. Dans les systèmes murins, XBP1 est largement utilisé pour étudier la différenciation et la fonction des cellules sécrétoires professionnelles, l’adaptation métabolique et les interactions avec la signalisation inflammatoire dans des tissus soumis à un stress chronique du RE. Une activité dérégulée de XBP1 a été impliquée dans des modèles de maladies métaboliques, de neurodégénérescence et de pathologies à médiation immunitaire, via une signalisation UPR persistante et des altérations des voies des cytokines et de survie cellulaire.

XBP1 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Xbp1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Xbp1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Xbp1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Xbp1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.