Plasmide CRISPR d'Activation (m) XBP1: sc-423727-ACT

Le gène Xbp1 de la souris code le facteur de transcription XBP1, un régulateur central de la réponse aux protéines mal repliées (UPR), activée en aval de l’épissage de l’ARNm médié par IRE1α lors d’un stress du réticulum endoplasmique (RE). XBP1 contrôle des programmes transcriptionnels qui augmentent la capacité de repliement du RE, favorisent la dégradation associée au RE (ERAD) et soutiennent la différenciation des cellules sécrétoires ainsi que la production d’immunoglobulines dans les plasmocytes. En s’intégrant aux voies de la protéostasie, du métabolisme lipidique et de la signalisation inflammatoire, XBP1 influence l’adaptation cellulaire au stress métabolique et à l’activation immunitaire. Une signalisation XBP1 dérégulée a été associée à des états pathologiques de stress du RE étudiés dans des modèles d’inflammation, de neurodégénérescence, de diabète et de biologie du cancer.

XBP1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Xbp1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

XBP1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Xbp1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Xbp1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de XBP1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Xbp1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de XBP1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie XBP1 dans les cellules tumorales présentant une expression de Xbp1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.