Plasmide Double Nickase (h) WWOX: sc-403070-NIC

WWOX (oxydoréductase contenant des domaines WW) est un suppresseur de tumeur encodé au sein du site fragile commun FRA16D et agit comme une protéine d’échafaudage qui intègre la signalisation au niveau des adhérences focales, des mitochondries et du noyau. Grâce à ses domaines WW, WWOX se lie à des partenaires riches en proline pour moduler l’apoptose, les réponses aux dommages de l’ADN et la signalisation du stress cellulaire, avec des liens rapportés avec les voies associées à p53 et au TGF-β, ainsi qu’avec la régulation de programmes transcriptionnels. La perte ou la diminution d’expression de WWOX est fréquemment observée dans de nombreux types de cancers et est associée à l’instabilité génomique et à une survie cellulaire altérée. Dans le système nerveux, le dysfonctionnement de WWOX est associé à des phénotypes neurodéveloppementaux, ce qui étaye son rôle étendu dans le contrôle de l’équilibre prolifération–mort et de l’homéostasie cellulaire.

WWOX Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus WWOX dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de WWOX. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de WWOX. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de WWOX.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.