Plasmide CRISPR/Cas9 KO Wnt-7b (m): sc-423722

Présentation

Wnt7b code la glycoprotéine sécrétée Wnt-7b, un ligand qui active les voies de signalisation Wnt canoniques et non canoniques afin de réguler les décisions de destinée cellulaire, la prolifération, la polarité et la mise en place des tissus au cours de l’embryogenèse et de l’homéostasie postnatale chez la souris. La liaison de Wnt-7b aux récepteurs Frizzled/LRP influence la transcription dépendante de la β-caténine ainsi que les voies de polarité planaire et celles liées au Ca²⁺, modelant les interactions épithélio-mésenchymateuses et la morphogenèse des organes. Une activité dérégulée de Wnt7b a été associée à des programmes développementaux aberrants et à des processus de remodelage recoupant des signalisations oncogéniques, la fibrose et des microenvironnements inflammatoires dans de nombreux contextes tissulaires. En tant que nœud de voie, Wnt-7b est fréquemment étudiée pour ses rôles dans le comportement des cellules souches/progénitrices, la biologie vasculaire et des voies aériennes, ainsi que pour ses interactions avec les voies TGF-β, Hedgehog et Notch.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Wnt-7b (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Wnt7b dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Wnt7b, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Wnt7b à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Wnt-7b.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Wnt7b pour l'étude de la signalisation de Wnt-7b, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Wnt7b essentiels à la fonction de Wnt-7b
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Wnt7b pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Wnt-7b plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Wnt-7b plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Wnt7b. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Wnt-7b plasmide HDR (m) et le Wnt-7b (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Wnt7b pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Wnt7b définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.