Particules Lentivirales d'Activation (m) Wnt-5a: sc-423718-LAC

Le gène murin Wnt5a code Wnt-5a, une glycoprotéine sécrétée qui transmet préférentiellement ses signaux via des voies Wnt non canoniques afin de réguler l’organisation des tissus, la polarité cellulaire et la migration directionnelle. Wnt-5a se lie à des récepteurs tels que ROR2 et à certains membres spécifiques de la famille Frizzled pour moduler la polarité planaire et une signalisation dépendante du Ca2+, avec des effets en aval sur le remodelage du cytosquelette et l’activité des petites GTPases. Dans de nombreux contextes, elle antagonise ou reconfigure les programmes transcriptionnels β-caténine/TCF, coordonnant la différenciation et la morphogenèse tout au long du développement et du maintien de l’homéostasie des tissus adultes. Une dérégulation de la signalisation Wnt5a a été associée à des microenvironnements inflammatoires, à une communication stroma–épithélium aberrante et à des phénotypes d’invasion modifiés, ce qui en fait une cible fréquemment étudiée en biologie du cancer, dans les modèles de fibrose et de signalisation immunitaire.

Les particules d'activation lentivirales Wnt-5a (m) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Wnt5a dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales Wnt-5a (m) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Wnt5a, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de Wnt-5a. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Wnt5a ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.