Plasmide CRISPR d'Activation (h) Wnt-3a: sc-400925-ACT

WNT3A code pour Wnt-3a, une glycoprotéine sécrétée qui active la voie canonique Wnt/β-caténine via des complexes de récepteurs Frizzled/LRP afin de réguler la spécification du destin cellulaire, la prolifération et la mise en place des patrons tissulaires. Wnt-3a interagit également avec des voies Wnt non canoniques qui influencent la dynamique du cytosquelette et la migration cellulaire, contribuant à des programmes transcriptionnels dépendants du contexte. Une expression dérégulée de WNT3A ou une activation anormale de la voie est impliquée dans des anomalies du développement et fait fréquemment l’objet d’études dans des modèles de signalisation oncogénique, de maintien des cellules souches et d’homéostasie tissulaire. En tant que ligand clé en amont, Wnt-3a est largement utilisée pour étudier les interactions entre voies de signalisation (crosstalk) avec les réseaux TGF-β, Notch et Hippo.

Wnt-3a Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de WNT3A sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Wnt-3a Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus WNT3A dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription WNT3A, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Wnt-3a. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus WNT3A natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Wnt-3a au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Wnt-3a dans les cellules tumorales présentant une expression de WNT3A silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.