Plasmide CRISPR/Cas9 KO Wnt-3 (m): sc-423715

Présentation

Wnt3 code la protéine Wnt-3, un ligand glycoprotéique sécrété qui initie la signalisation Wnt en se liant aux récepteurs Frizzled et aux co-récepteurs LRP5/6 afin de réguler la spécification du destin cellulaire, la prolifération et la mise en place des patrons tissulaires. Chez la souris, Wnt-3 est un moteur majeur des programmes transcriptionnels canoniques β-caténine/TCF au cours de l’embryogenèse précoce et de la formation des axes, avec des effets en aval sur la différenciation et les processus morphogénétiques. Une activité altérée de Wnt3 perturbe les réseaux de signalisation du développement et peut contribuer à une dérégulation de la voie, associée à des anomalies congénitales ainsi qu’à des contextes oncogéniques de signalisation Wnt/β-caténine. En tant que ligand de la voie, Wnt-3 est également pertinent pour étudier les interactions (cross-talk) avec les voies BMP, FGF et Notch dans des modèles de maintien et de différenciation des cellules souches.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Wnt-3 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Wnt3 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Wnt3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Wnt3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Wnt-3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Wnt3 pour l'étude de la signalisation de Wnt-3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Wnt3 essentiels à la fonction de Wnt-3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Wnt3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Wnt-3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Wnt-3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Wnt3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Wnt-3 plasmide HDR (m) et le Wnt-3 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Wnt3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Wnt3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.