Wnt-3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423715

Panoramica

Wnt3 codifica Wnt-3, un ligando glicoproteico secreto che avvia la segnalazione Wnt legandosi ai recettori Frizzled e ai co-recettori LRP5/6, regolando la specificazione del destino cellulare, la proliferazione e la definizione dei pattern tissutali. Nel topo, Wnt-3 è un fattore chiave dei programmi trascrizionali canonici β-catenina/TCF durante la primissima embriogenesi e la formazione degli assi, con effetti a valle sulla differenziazione e sui processi morfogenetici. Un’alterata attività di Wnt3 perturba le reti di segnalazione dello sviluppo e può contribuire a una deregolazione dell’output della via, associata ad anomalie congenite e a contesti oncogeni di segnalazione Wnt/β-catenina. In quanto ligando di via, Wnt-3 è rilevante anche per lo studio del cross-talk con le vie BMP, FGF e Notch in modelli di mantenimento e differenziamento delle cellule staminali.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Wnt-3 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Wnt3 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Wnt3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Wnt3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Wnt-3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Wnt3 per lo studio della segnalazione di Wnt-3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Wnt3 critici per la funzione di Wnt-3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Wnt3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Wnt-3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Wnt-3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Wnt3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Wnt-3 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Wnt-3 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Wnt3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Wnt3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.