Plasmide CRISPR/Cas9 KO Wnt-3 (h): sc-401936

Présentation

WNT3 code pour la glycoprotéine sécrétée Wnt-3, un ligand canonique de la voie Wnt qui active les récepteurs Frizzled/LRP afin de stabiliser la β-caténine et de moduler la transcription dépendante de TCF/LEF. Cette signalisation contrôle la mise en place du plan d’organisation embryonnaire, le maintien des cellules souches et progénitrices, ainsi que la régulation des programmes de prolifération et de différenciation dans de nombreux tissus. Une activité aberrante de WNT3/Wnt-3 perturbe la sortie du réseau Wnt/β-caténine et interagit avec des voies régissant les dynamiques épithélio-mésenchymateuses, la spécification du destin cellulaire et l’homéostasie tissulaire. La dérégulation de la signalisation associée à Wnt-3 a été impliquée dans des anomalies du développement et des états transcriptionnels liés aux maladies, ce qui en fait une cible utile pour des études mécanistiques des voies de signalisation.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Wnt-3 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène WNT3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du WNT3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert WNT3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Wnt-3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en WNT3 pour l'étude de la signalisation de Wnt-3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de WNT3 essentiels à la fonction de Wnt-3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de WNT3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Wnt-3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Wnt-3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus WNT3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Wnt-3 plasmide HDR (h) et le Wnt-3 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie WNT3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles WNT3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.