Plasmide CRISPR/Cas9 KO Wnt-2b (m): sc-423714
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Wnt-2b Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
- Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique Wnt-2b, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
- Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Wnt-2b Antibody (C-2): sc-166502
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide CRISPR/Cas9 KO Wnt-2b (m) | sc-423714 | 20 µg | $397.00 |
Présentation
Wnt2b code pour la glycoprotéine sécrétée Wnt-2b, un ligand qui active les complexes récepteurs Frizzled/LRP afin de réguler la signalisation canonique dépendante de la β-caténine et, dans certains contextes, les voies Wnt non canoniques. Dans les tissus de la souris, Wnt-2b contribue à la spécification du destin cellulaire, au contrôle de la prolifération, aux interactions épithélio-mésenchymateuses et à la morphogenèse des organes, avec des rôles particulièrement importants rapportés dans le développement de l’œil et du télencéphale. En modulant les programmes transcriptionnels en aval de TCF/LEF, Wnt-2b influence le maintien des cellules souches/progénitrices et la mise en place des territoires tissulaires. Une signalisation Wnt2b dérégulée est pertinente pour l’étude des anomalies du développement et de la pathobiologie dépendante de Wnt, y compris des mécanismes liés à une croissance et une différenciation aberrantes.
Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Wnt-2b (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Wnt2b dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Wnt2b, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.
La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Wnt2b à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Wnt-2b.
Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Wnt2b pour l'étude de la signalisation de Wnt-2b, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.
Caractéristiques principales
- sgRNA ciblant le ou les exons de Wnt2b essentiels à la fonction de Wnt-2b
Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Wnt2b pour améliorer l'efficacité du knock-out
Compatible avec l'administration par transfection
Variantes de conception
CRISPR +/- HDR
- Les gRNA codés par le Wnt-2b plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le Wnt-2b plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Wnt2b. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Les constructions donneuses HDR codées par le Wnt-2b plasmide HDR (m) et le Wnt-2b (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Wnt2b pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Wnt2b définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.