Plasmide CRISPR d'Activation (h) Wnt-10a: sc-403285-ACT

WNT10A code pour Wnt-10a, un ligand sécrété de la famille Wnt qui régule la spécification du destin cellulaire, la prolifération et l’organisation des tissus via la signalisation canonique β-caténine/TCF et, selon le contexte, des voies Wnt non canoniques. L’activité de Wnt-10a influence les interactions épithélio-mésenchymateuses et les programmes de différenciation, avec des rôles majeurs dans le développement et le maintien des annexes ectodermiques telles que les follicules pileux et les dents. Une dérégulation de la signalisation WNT10A a été associée à des dysplasies ectodermiques congénitales et à des anomalies odontogènes, et des modifications d’expression sont également étudiées dans les cancers, où le remodelage des voies Wnt affecte le comportement des cellules tumorales et les réponses du stroma. En tant que nœud de voie, WNT10A est fréquemment utilisé pour étudier les effets spécifiques des ligands Wnt sur les réseaux transcriptionnels, la morphogenèse et la dynamique des cellules souches/progénitrices.

Wnt-10a Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de WNT10A sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Wnt-10a Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus WNT10A dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription WNT10A, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Wnt-10a. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus WNT10A natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Wnt-10a au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Wnt-10a dans les cellules tumorales présentant une expression de WNT10A silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.