Plasmide CRISPR d'Activation (h) Wnt-1: sc-400982-ACT

Le gène humain **WNT1** code la glycoprotéine sécrétée Wnt-1, un ligand canonique de la voie Wnt qui initie la signalisation des récepteurs Frizzled/LRP afin de stabiliser la **β-caténine** et de réguler la transcription dépendante de **TCF/LEF**. Cette voie contrôle la spécification du destin cellulaire, la prolifération et la différenciation au cours de l’embryogenèse et de l’homéostasie tissulaire, avec des effets en aval sur le maintien des cellules souches et la mise en place de motifs morphogénétiques. Une signalisation WNT1 dérégulée, ainsi que des perturbations plus larges du réseau Wnt/β-caténine, sont associées à des troubles du développement et à des processus oncogéniques via des programmes transcriptionnels altérés, des dynamiques épithélio–mésenchymateuses et un contrôle du cycle cellulaire dépendant du contexte. WNT1 est donc largement utilisé pour étudier l’activation de la voie Wnt induite par un ligand, la régulation par rétrocontrôle et les interactions avec les axes de signalisation MAPK, PI3K/AKT et BMP dans des modèles cellulaires humains.

Wnt-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de WNT1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Wnt-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus WNT1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription WNT1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Wnt-1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus WNT1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Wnt-1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Wnt-1 dans les cellules tumorales présentant une expression de WNT1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.