Plasmide CRISPR d'Activation (h) WNK2: sc-407834-ACT

WNK2 (« with-no-lysine [K] kinase 2 ») code une kinase sérine/thréonine qui agit comme régulateur en amont du transport ionique et de la signalisation cellulaire, en influençant des cascades de phosphorylation qui modulent les transporteurs membranaires et la dynamique du cytosquelette. Dans les cellules humaines, WNK2 intègre des signaux qui affectent l’équilibre osmotique et les sorties de signalisation associées à la voie MAPK, façonnant des processus tels que la prolifération, la migration et les réponses au stress. Des altérations de l’expression de WNK2 ou de sa régulation ont été associées à des réseaux de signalisation dérégulés en biologie du cancer et dans d’autres contextes où l’équilibre des voies dépendantes des kinases est perturbé, ce qui en fait un nœud utile pour des études mécanistiques du dialogue entre voies (crosstalk). En tant que kinase ayant des effets à l’échelle des voies, WNK2 est fréquemment étudiée pour son impact sur la régulation des transporteurs en aval et sur le remodelage de la signalisation dans des modèles cellulaires pertinents pour les maladies.

WNK2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de WNK2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

WNK2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus WNK2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription WNK2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de WNK2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus WNK2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de WNK2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie WNK2 dans les cellules tumorales présentant une expression de WNK2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.