Plasmide CRISPR d'Activation (h) WISP-2: sc-402996-ACT

WISP2 (WISP-2/CCN5) est une protéine matricellulaire sécrétée de la famille CCN, qui intègre les signaux issus de la matrice extracellulaire avec la signalisation des facteurs de croissance afin d’influencer l’adhésion, la migration et la prolifération cellulaires. Elle est régulée en aval de la voie Wnt/β-caténine et interagit avec les voies TGF-β, IGF et celles médiées par les intégrines, lesquelles contrôlent le remodelage du cytosquelette et la communication stroma–épithélium. Dans les tissus humains, l’expression de WISP-2 a été associée à des programmes de remodelage tissulaire et à des réponses fibroprolifératives, et sa dérégulation est étudiée dans des contextes tels que la biologie du cancer, l’inflammation métabolique et les pathologies vasculaires. Ces propriétés font de WISP-2 un nœud pertinent pour étudier le contrôle transcriptionnel dépendant de la MEC, les transitions d’état cellulaire et les phénotypes induits par le microenvironnement.

WISP-2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de WISP2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

WISP-2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus WISP2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription WISP2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de WISP-2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus WISP2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de WISP-2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie WISP-2 dans les cellules tumorales présentant une expression de WISP2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.