Plasmide Double Nickase (h) WIPI-2: sc-411876-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) WIPI-2 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide WIPI-2 Double Nickase (h) et le plasmide WIPI-2 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant WIPI2. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
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| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) WIPI-2 | sc-411876-NIC | 20 µg | $410.00 |
WIPI2 code pour WIPI-2, une protéine de la famille PROPPIN se liant au phosphatidylinositol 3-phosphate, qui agit comme échafaudage précoce dans la macroautophagie. WIPI-2 recrute et organise le complexe ATG12–ATG5–ATG16L1 afin de favoriser la lipidation de LC3 et l’expansion de la membrane de l’autophagosome en aval de la signalisation de la PI3K de classe III. Par ces fonctions, WIPI-2 contribue à la protéostasie, au contrôle qualité des organites et à l’adaptation cellulaire au stress nutritif. Une autophagie dépendante de WIPI2 dérégulée a été étudiée dans des contextes incluant la neurodégénérescence, la biologie des infections et le métabolisme des cellules cancéreuses, où des altérations du flux autophagique peuvent influencer la survie et la signalisation inflammatoire.
WIPI-2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus WIPI2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de WIPI2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de WIPI2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de WIPI2.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.