Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
Plasmide Double Nickase (h) Wip1: sc-400980-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Wip1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Wip1 Double Nickase (h) et le plasmide Wip1 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant PPM1D. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Wip1 Antibody (F-10): sc-376257
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Wip1 | sc-400980-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) Wip1 | sc-400980-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PPM1D code Wip1 (PPM1D), une phosphatase protéique Ser/Thr dépendante du Mg2+/Mn2+ qui agit comme régulateur par rétrocontrôle de la signalisation des dommages à l’ADN. Wip1 atténue les voies de réponse au stress en déphosphorylant des médiateurs clés, notamment p53, des composants des voies ATM/ATR et des nœuds de signalisation MAPK, modulant ainsi la levée des points de contrôle du cycle cellulaire et l’apoptose. Par ces activités, PPM1D influence la stabilité du génome, la tolérance au stress de réplication et les réponses de signalisation inflammatoire. Une activité altérée de PPM1D/Wip1 a été associée à une réparation de l’ADN et à un contrôle des checkpoints dérégulés dans plusieurs contextes pertinents pour la maladie, ce qui soutient son utilisation comme cible mécanistique dans la recherche sur l’intégrité du génome.
Wip1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus PPM1D dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de PPM1D. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de PPM1D. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de PPM1D.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.