Plasmide CRISPR d'Activation (h) Wig-1: sc-406638-ACT

ZMAT3 (Wig-1) est une protéine de liaison à l’ARN à doigts de zinc, inductible par p53, qui régule l’expression génique post-transcriptionnelle en se liant à des éléments riches en AU et en stabilisant ou en modulant la traduction de certains ARNm. En contrôlant le renouvellement de l’ARN et des transcrits sensibles au stress, Wig-1 influence la progression du cycle cellulaire, l’apoptose et les programmes de surveillance de l’ARN qui façonnent les réponses cellulaires aux dommages de l’ADN et au stress oncogénique. Une activité dérégulée de ZMAT3 a été associée à une altération de la sortie du réseau p53 et à des modifications des signatures d’expression génique liées aux tumeurs, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques en biologie du cancer et en signalisation du stress. Ses fonctions de liaison à l’ARN permettent également d’explorer les voies de stabilité des ARNm et la régulation dépendante du contexte de transcrits pro- et anti-apoptotiques.

Wig-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ZMAT3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Wig-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ZMAT3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ZMAT3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Wig-1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ZMAT3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Wig-1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Wig-1 dans les cellules tumorales présentant une expression de ZMAT3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.