Plasmide CRISPR d'Activation (h) WIF-1: sc-402389-ACT

WIF1 code le facteur inhibiteur de Wnt 1 (WIF‑1), un antagoniste extracellulaire sécrété qui se lie aux ligands WNT et limite leur interaction avec les récepteurs, atténuant ainsi les programmes transcriptionnels canoniques β‑caténine/TCF ainsi que des sorties de signalisation Wnt non canoniques associées. En restreignant le contrôle exercé par Wnt sur la prolifération, la différenciation et l’organisation des tissus, WIF‑1 contribue à la régulation du comportement des cellules souches/progénitrices et des gradients de signalisation extracellulaire. Une diminution de l’expression de WIF1 est fréquemment associée à une activité aberrante de la voie Wnt et à des caractéristiques épithélio‑mésenchymateuses altérées dans de multiples contextes pertinents pour la maladie, notamment la transformation oncogénique et le remodelage fibrotique. En tant que modulateur de la disponibilité des ligands, WIF‑1 est couramment étudié dans le cadre des interactions entre voies (« cross-talk ») avec les réseaux de signalisation Hedgehog, TGF‑β et inflammatoires qui convergent vers le destin cellulaire et l’homéostasie de la matrice.

WIF-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de WIF1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

WIF-1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus WIF1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription WIF1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de WIF-1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus WIF1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de WIF-1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie WIF-1 dans les cellules tumorales présentant une expression de WIF1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.