Plasmide CRISPR/Cas9 KO WDR96 (h): sc-407276

Présentation

CFAP43 code pour la protéine humaine WDR96 contenant des répétitions WD, un échafaudage présumé impliqué dans des interactions protéine–protéine soutenant l’architecture des cils et des flagelles. Les protéines à répétitions WD organisent fréquemment des assemblages multiprotéiques qui régulent des structures basées sur les microtubules, et CFAP43 a été associé à des processus sous-jacents à l’organisation de l’axonème et à la fonction des cils motiles. La perturbation de composants associés aux cils peut modifier la polarité cellulaire, la détection des flux de fluides et les voies de signalisation intracellulaires coordonnées au niveau du centrosome/corps basal. Des variations génétiques de CFAP43 ont été associées à des défauts du flagelle des spermatozoïdes et à des phénotypes d’infertilité masculine, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude des ciliopathies et de la biologie de la reproduction.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO WDR96 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène CFAP43 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du CFAP43, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert CFAP43 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine WDR96.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en CFAP43 pour l'étude de la signalisation de WDR96, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de CFAP43 essentiels à la fonction de WDR96
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de CFAP43 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le WDR96 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le WDR96 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus CFAP43. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le WDR96 plasmide HDR (h) et le WDR96 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie CFAP43 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles CFAP43 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.